色譜分析梯度洗脫問題

色譜分析中的梯度洗脫是一種常用的洗脫方式，它可以改善大分子化合物方法的重現性，并且分離的過程通常比較快，效率高而且簡便。

梯度洗脫主要分為線性梯度、曲線梯度和分段梯度，其中線性和分段梯度應用最廣。

以下是使用梯度洗脫的常見原因：

1. 樣品極性范圍較大，具有較寬的K值范圍。這超出了等度洗脫的優先目標范圍（1≤k≤20），若采用等度洗脫可能會導致樣品運行時間過長，分離度不夠或目標化合物殘留未洗脫下來等問題。若采用梯度洗脫，則可以大大縮短方法的運行時間，提高分離效果，避免殘留問題的發生等。
2. 樣品中含有晚出峰的干擾物，會污染色譜柱或者是在后續運行中才洗脫出來；此外，樣品中若含有極性大的化合物，在等度洗脫的時候也可能會干擾樣品中前端出峰的目標化合物的分離。采用梯度洗脫往往就能夠得到更好的分離，而可以省去樣品處理的過程。

對于一個未知樣品，通常反相色譜條件最初的流動相梯度會參照如下方法進行設置。如果在上述條件下，30分鐘之后還有化合物被洗脫下來，則需要考慮更換保留能力更弱的固定相，或更換洗脫能力更強的有機溶劑，重新進行實驗。